Ocorrência de Mollicutes e Ureaplasma spp. em surto de doença reprodutiva em rebanho bovino no Estado da Paraíba / Occurrence of Mollicutes and Ureaplasma spp. in outbreak of reproductive disease in cattle herds, State of Paraíba, Brazil

Em março de 2012 foi diagnosticado um surto de doença reprodutiva em rebanho bovino no Estado da Paraíba, Brasil. Foram examinadas 32 vacas e dois touros da raça Girolando. As vacas apresentaram sinais de doença reprodutiva como repetição de cio, vulvovaginite granular, infertilidade e abortos. As amostras de suabes vaginais e prepuciais foram colhidas e submetidas a isolamento bacteriano e PCR. As reações da PCR para Mollicutes e Ureaplasma spp. foram realizadas com os iniciadores MGSO-GPO3 e UGP'F-UGP'R, respectivamente. Na Nested PCR para Ureaplasma diversum, os iniciadores usados foram UD1, UD2, UD3 e UD4. Para isolamento bacteriano, as amostras foram diluídas de 10-1 até 10-5, semeadas em meio "UB", líquido e placa, sendo incubadas por até 21 dias a 37ºC em jarra de microaerofilia. A frequência de Mollicutes detectada na PCR foi de 65,6% e para Ureaplasma spp. foi de 50,0%, enquanto que para U. diversum foi de 15,6%. No isolamento a frequência de Mollicutes foi de 57,1% e para Ureaplasma spp. foi de 28,6%. No ágar "UB" foi visualizado o crescimento misto de Mycoplasma spp. e Ureaplasma spp. em seis amostras. Foi confirmado o envolvimento de micro-organismos da Classe Mollicutes em surto de doença reprodutiva em vacas no sertão paraibano.

In March of 2012 was investigated a reproductive disease outbreak in cattle herds from Paraíba State, Brazil. Were examined 32 cows and two bulls Giroland breed. The cows showed signs and symptoms of reproductive failure such as repeat breeding, granular vulvovaginitis, infertility and abortions. Vaginal and preputial mucous samples were collected for analysis by PCR and isolation. The PCR reactions for Mollicutes and Ureaplasma spp. were realized with primers MGSO and GPO3, and UGP'F and UGP'R respectively. The nested PCR assay for Ureaplasma diversum was realized with primers UD1, UD2, UD3 and UD4. For bacteriologic isolation, obtained samples were diluted up to 10-1 at 10-5, inoculated into liquid and solid "UB" medium, and incubated for up to 21 days, at 37ºC in microaerophilie jar. In the PCR reactions the frequency of Mollicutes detected in the analyzed vaginal mucous samples was 65.6, for Ureaplasma spp. was 50.0, while for U. diversum was 15.6. The frequency for isolation of Mollicutes was of 57.1 and for Ureaplasma spp. was of 28.6. In the UB agar was visualized growth of Mycoplasma spp. and Ureaplasma spp., associated in six of the samples. In the cows the presence of Mollicutes and Ureaplasma spp. was confirmed for the reproductive disease outbreak in the semiarid region of Paraiba.

Associação entre Mycoplasma spp. e ácaros do conduto auditivo de bovinos / Mycoplasmas species associated with the ear mites in cattle

Esse estudo foi realizado com o objetivo de verificar a associação entre micoplasmas e ácaros (Raillietia auris e R. flechtmanni) no conduto auditivo de bovinos. Foram realizadas lavagens no conduto auditivo externo de 60 bovinos abatidos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Para a lavagem dos condutos auditivos foi utilizada solução salina tamponada (PBS, pH 7.2) em seringas estéreis de 60mL. Para o isolamento de micoplasmas foram utilizados pools de ácaros por animal, lavados sucessivamente em 1mL de meio Hayflick modificado. Os lavados dos ácaros foram diluídos de 10-1 até 10-5 e repicados em meio Hayflick modificado, sólido e líquido e incubados a 37°C por 48-72 horas em microaerofilia. A identificação das espécies de micoplasmas foi realizada pelo teste da imunoperoxidase indireta (IPI). Verificou-se alta prevalência de ácaros do gênero Raillietia spp. 76,7% (46/60). O parasitismo por ácaros e micoplasmas foi verificado em 40 animais (74,1%), sendo esta associação significativa (p<0,001). Dos ácaros processados para isolamento de micoplasmas, 193 foram fêmeas e 25 machos. A frequência de Mycoplasma em Raillietia spp. foi de 81,2% (177/218) (p<0.001). Das fêmeas identificadas, 52,3% (101/193) foram R. auris e 47,7% (92/193) R. flechtmanni. A frequência de Mycoplasma nas fêmeas de R. auris foi de 75,2% (76/101) e na espécie R. flechtmanni foi de 88% (81/92) (P<0.05). As espécies de micoplasmas tipificadas pela IPI nos ácaros Raillietia auris foram: M. alkalescens 6,9%, M. arginini 3,4%, M. bovirhinis 9,2%, M. conjunctivae 18,4%, M. mycoides mycoides LC 8,0%, M. capricolum 5,7%. Em R. flechtmanni as espécies de micoplasmas identificadas foram: M. alkalescens 12,2%, M. arginini 1,0%, M. bovirhinis 18,9%, M. bovis 2,2%, M. conjunctivae 21,0%, M. mycoides mycoides LC 11,0% e M. capricolum 4,4%. As espécies de micoplasmas identificadas no conduto auditivo externo dos bovinos foram as mesmas presentes nos ácaros R. auris e R. flechtmanni. Os resultados confirmam que o conduto auditivo externo de bovinos é um habitat de Mycoplasma spp., incluindo espécies potencialmente patogênicas para os rebanhos, além dos ácaros R. auris e R. flechtmanni estarem associados com esses molicutes carreando-os em seu organismo.

This study was carried out to assess the association between of mycoplasmas species with ear mites Raillietia auris and R. flechtmanni in the external ear canal of 60 bovines at slaughter time from the State of Rio de Janeiro, Brazil. Steril syringes (60ml) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. Were processed 218 mites for mycoplasma isolation. A pool of mites from each sampled bovine was washed five times sucessively in 1mL of liquid modified Hayflick´s medium. The washed mites obtained were diluted up to 10-1 at 10-5, inoculated in liquid and solid Hayflick´s media and incubated at 37ºC for 2-3 days, being the plates put into jar for the obtention of microaerofilia condition. The Typical colonies were typified by the indirect imunoperoxidase test (IPI) with paper discs satured with hyperimmune rabbit sera. In the studied bovine high prevalence was verified Raillietia spp. 76.7% (46/60). The parasitism by mycoplasmas and mites was verified in 40 animals (74.1%), this association was significant (p<0.001). Among the mites processed for isolation mycoplasmas 193 were female and 25 males. The frequency of Mycoplasma in Raillietia spp. was of 81.2% (177/218) (p<0.001). Of the females identified 52.3% (101/193) were R. auris and 47.7% (92/193) were R. flechtmanni. The frequency of Mycoplasma in the females of R. auris was of 75.2% (76/101) and 88% (81/92) in R. flechtmanni (P<0.05). The mycoplasmas species typified by IPI in the Raillietia auris mites were M. alkalescens 6.9%, M. arginini 3.4%, M. bovirhinis 9.2%, M. conjunctivae 18.4%, M. mycoides mycoides LC 8.0%, M. capricolum 5.7%. In the R. flechtmanni mites mycoplasmas species typified were M. alkalescens 12.2%, M. arginini 1.0%, M. bovirhinis 18.9%, M. bovis 2.2%, M. conjunctivae 21.0%, M. mycoides mycoides LC 11.0% e M. capricolum 4.4%. The species of identified mycoplasmas in the external ear canal bovine and mites were exactly the same. The results confirm that the external ear canal cattle's ear canal is also a mycoplasmas source, including potentially pathogenic species for cattle, and these mollicutes are closely related with mites Raillietia spp. that is carrier and this agent in your organism.

Protein profile analysis by SDS-Page of "Mycoplasma gallisepticum" strains S6(208) and F-K810 grown in Hayflick's and Frey's media

The "Mycoplasma gallisepticum" strains [wild-type S6(208) and vaccine-type F-K810] grown in Frey's and hayflick's media were analysed by SDS-PAGE. No visual changes in the protein profiles of these strains were observed regardless of the media composition used, although the polyacrylamide gel electrophoretograms showed minor differences do exist when densitometer traces of the gel are compared. Both strains were easily differentiated on SDS-PAGE analysis by a peptide band p75, that is specific for MG F-K810 strain, used as vaccine.